1.Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率測定法如何工作？該測定實際量化了什么？

答：Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率測定試劑盒*綠色熒光*（貨號10056）包含僅與還原型谷胱甘肽（即GSH）反應(yīng)而不與GSSG反應(yīng)的探針。通過測量還原前的GSH濃度和還原后的總GSH濃度，用戶可以計算GSSG濃度以及GSH / GSSG比率。有關(guān)特定的方程式和過程，請查閱我們的示例協(xié)議。

2.我的Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析試劑盒的GSH和總GSH校準(zhǔn)曲線是否有問題？為什么我的標(biāo)準(zhǔn)曲線沒有意義？

答：從理論上講，谷胱甘肽和總谷胱甘肽的校準(zhǔn)曲線應(yīng)相當(dāng)接近。要記住的重要一點是，連續(xù)稀釋后[GSH]為5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563、0.0781和0 μM，而[TGSH]為10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125， 0.1563和0 μM。在相同的系列稀釋后。這是因為GSSG / GSH摩爾比為：1 GSSG? 2 GSH。因此，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線時，TGSH的x軸值需要是GSH的x軸值的兩倍。

3.我可以將Triton X-100用作Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比分析試劑盒*綠色熒光*（貨號10056）的裂解緩沖液嗎？我可以使用X緩沖液裂解/制備樣品嗎？

答：您可以使用Triton X-100，但是它可能會導(dǎo)致測定讀數(shù)的背景增加。有關(guān)特定緩沖液的其他問題，請通過helen@aatbio.com與我們的技術(shù)支持聯(lián)系。

4.在使用Amplite 熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析試劑盒*綠色熒光*（貨號10056）之前，我需要對樣品進(jìn)行脫蛋白處理嗎？

答;如果發(fā)現(xiàn)不一致或意外的結(jié)果，則一種解決方案可能是在使用測定之前對樣品進(jìn)行脫蛋白處理。

5.為什么我的GSH濃度大于總GSH濃度？為什么我計算出的GSH / TGSH比值大于1？

答：這種結(jié)果有多種可能的原因。例如，[GSH]和[TGSH]之間可能沒有統(tǒng)計學(xué)上的顯著差異，表明樣品中的GSSG很少甚至沒有。在這種情況下，由于實驗偏差，GSH濃度可能會大大高于GSH總濃度。另一種可能的解釋是由于測定活性降低，可能導(dǎo)致測定結(jié)果不一致。該測定成分在室溫下以及暴露于光線下均不穩(wěn)定，應(yīng)在制備后的兩個小時內(nèi)使用。對于具有更高穩(wěn)定性的試劑盒，我們建議使用Amplite 快速熒光谷胱甘肽GSH / GSSG比率檢測試劑盒*綠色熒光*。

6.為什么總GSH標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度等于GSSG標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度的兩倍？為什么[GSSG]等于（[總GSH]-[GSH]）除以2？

答：還原后，1摩爾GSSG變?yōu)?摩爾GSH。因此，如果初始GSSG濃度為1μM，則還原后的GSH濃度為2μM。相反，要從[總GSH]中確定[GSSG]，則必須除以2以說明GSSG與GSH的摩爾比：1 GSSG? 2 GSH。

7.Amplite 熒光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速檢測試劑盒 綠色熒光（Cat＃10060）中提供的探針僅與還原的GSH反應(yīng)，而與GSSG不反應(yīng)。為什么還需要準(zhǔn)備GSSG標(biāo)準(zhǔn)曲線？

答：在氧化應(yīng)激期間，GSSG會在細(xì)胞中積累，從而增加GSSG與GSH的比例。由于Thiolite Green 520WS僅與GSH反應(yīng)，因此必須首先將累積的GSSG酶轉(zhuǎn)化為GSH。因此，要測量GSH和總GSH，必須創(chuàng)建GSH和GSSG標(biāo)準(zhǔn)曲線。減少的GSH使用GSH標(biāo)準(zhǔn)測量，總GSH（GSH和GSSG）使用GSSG標(biāo)準(zhǔn)測量。要計算GSSG，請從總GSH中減去GSH量，然后使用此值確定終的GSH / GSSG比。