產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

嘌呤霉素是由白黑鏈霉菌發(fā)酵代謝產(chǎn)生的一種氨基糖苷類抗生素，通過抑制蛋白質(zhì)合成而殺死革蘭氏陽性菌，各種動(dòng)物和昆蟲細(xì)胞。作用機(jī)制在于嘌呤霉素是氨酰-tRNA分子3’末端的類似物，能夠與核糖體的A位點(diǎn)結(jié)合并摻入到延伸的肽鏈中。嘌呤霉素同A位點(diǎn)結(jié)合后，不會(huì)參與隨后的任何反應(yīng)，從而導(dǎo)致蛋白質(zhì)合成的提前終止并釋放出C-末端含有嘌呤霉素的不成熟多肽。

別名：二鹽酸嘌呤霉素；嘌呤霉素鹽酸鹽

CAS：58-58-2

分子式：C₂₂H₂₉N₇O₅ · 2HCl

分子量：544.44

純度：≥98%

儲(chǔ)存條件：-20℃

外觀：白色粉末

單位：瓶

有效期：3年

應(yīng)用： 

常用于篩選能夠表達(dá)pac基因（puror）的細(xì)胞株，一般2天內(nèi)可以殺死99%的不表達(dá)pac基因的細(xì)胞。

使用方法：（根據(jù)實(shí)際需要參閱相關(guān)文獻(xiàn)配制和使用）

用蒸餾水溶解，參考濃度為50mg/ml，過濾除菌后分裝于-20℃凍存；也可溶于甲醇，配制成10 mg/ml的儲(chǔ)存液。

篩選哺乳動(dòng)物細(xì)胞的建議濃度為1-10ug/ml，*佳工作濃度可根據(jù)劑量反應(yīng)曲線確定。

嘌呤霉素劑量反應(yīng)曲線的確定(以shRNA轉(zhuǎn)染或者慢病毒感染為例）：

嘌呤霉素的有效篩選濃度與細(xì)胞類型、生長(zhǎng)狀態(tài)、細(xì)胞密度、細(xì)胞代謝及細(xì)胞所處細(xì)胞周期等因素相關(guān)。為了篩選到穩(wěn)定表達(dá)的shRNA或感染病毒的細(xì)胞株，確定殺死未轉(zhuǎn)染/感染細(xì)胞的*低濃度嘌呤霉素非常重要。對(duì)于初次使用的細(xì)胞，一般需要通過實(shí)驗(yàn)來確定適合自身實(shí)驗(yàn)體系的劑量反應(yīng)曲線(dose-response curve or kill curve)。

1、在24孔板中以5~8×104cells/孔的密度接種細(xì)胞，接種夠量的孔以便進(jìn)行后續(xù)的劑量梯度實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)過夜。

2、在培養(yǎng)過夜后的細(xì)胞中更換新鮮配制的篩選培養(yǎng)基，該篩選培養(yǎng)基為含不同濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基(如0、1、2.5、5、7.5、10μg/ml等)，更換培養(yǎng)基后在細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。

3、由于嘌呤霉素可以快速作用于細(xì)胞，一般2天內(nèi)可以殺死99%的未表達(dá)pac基因的細(xì)胞，所以在加嘌呤霉素后的1-2天就可以進(jìn)行觀察細(xì)胞存活率，從而確定有效殺死正常細(xì)胞的藥物*低濃度。如果細(xì)胞耐藥性比較強(qiáng)，需要每日觀察，一般4-10天內(nèi)即可確定嘌呤霉素的*低濃度。

哺乳動(dòng)物穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株的篩選：

轉(zhuǎn)染含有pac基因的質(zhì)粒或者感染含有該基因的病毒后，即可篩選穩(wěn)定表達(dá)株。

1、細(xì)胞轉(zhuǎn)染或感染48小時(shí)后，將細(xì)胞置于含有適當(dāng)濃度嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)基中培養(yǎng)，此為處理組。

注意：當(dāng)細(xì)胞處于分裂活躍期時(shí)，抗生素作用最明顯。細(xì)胞過于密集，抗生素產(chǎn)生的效力會(huì)明顯下降，所以細(xì)胞的密度*好不超過25%。建議同時(shí)做一個(gè)正常細(xì)胞的對(duì)照組。轉(zhuǎn)染或感染48小時(shí)后，如果細(xì)胞過密也可以消化后重新接種細(xì)胞，培養(yǎng)過夜后即可進(jìn)行嘌呤霉素篩選。

2、每隔2-3天，更換含有嘌呤霉素的培養(yǎng)基。

3、篩選7天后，對(duì)照組正常細(xì)胞應(yīng)該100%死亡，處理組中存活的細(xì)胞為表達(dá)pac基因的細(xì)胞。然后根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康倪M(jìn)行多克隆或單克隆細(xì)胞的篩選。

注意：每日進(jìn)行細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)的觀察。嘌呤霉素的篩選至少需要24小時(shí)，有效濃度嘌呤霉素的篩選周期一般在2-10天。

4、待細(xì)胞可以穩(wěn)定生長(zhǎng)后，嘌呤霉素的濃度可以減半用于后續(xù)的培養(yǎng)。在得到穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株后，一般建議嘌呤霉素也持續(xù)加入，并2-3天更換含有嘌呤霉素的新鮮培養(yǎng)液。

注意事項(xiàng)：

1、 本產(chǎn)品僅供科研使用。請(qǐng)勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途

2、 本產(chǎn)品為有毒化合物，為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。